R ecovery

1. Keluarkan tabung beku dari nitrogen cair dan segera ke dalam penangas air 37℃, gemetar sedikit. Setelah cairan meleleh (sekitar 1-1,5 menit), keluarkan sedikit alkohol dan taruh di meja kerja yang sangat bersih.

2. Ambil suspensi sel ke dalam tabung sentrifuge 15ml dengan media 10ml (cuci tabung beku dengan media dan cuci semua sel yang menempel di dinding) dan sentrifus pada 1000 selama 5 menit.

3. Supernatan dibalik dan 1 ml media ditambahkan untuk mensuspensi sel. Asap ke dalam cawan berukuran 10 cm dengan 10 ml media dan goyangkan perlahan ke kiri dan kanan untuk mendistribusikan sel secara merata di dalam cawan.

4. Tandai jenis dan tanggal sel, nama manusia, dan seterusnya, masukkan ke dalam inkubator CO2, tempelkan sel dan ganti medianya.

5. Media diganti setiap 3 hari sekali.

P assage

1. Tanaman disebar untuk mencapai cakupan 80-90%.

2. Abup media asli .

3. Tambahkan trypsin yang sesuai (cukup tutupi sel) dan cerna selama 1-2 menit .

4. Pencernaan diakhiri dengan menambahkan volume yang sama dari media yang mengandung serum .

5. Tiup sel dengan pistol pipet dan biarkan semuanya ditangguhkan.

6. Sel disedot ke dalam tabung centrifuge 15ml dan disentrifugasi pada 1000 selama 5 menit.

7. Tuang supernatan dan tambahkan 1-2ml media untuk meledakkan semua sel.

8. Sel dilewatkan ke beberapa cawan kultur tergantung pada spesies sel. Umumnya, sel kanker terbagi menjadi 5 sel dan 3 sel normal ditransmisikan. Terus berkultivasi.

Bebas untuk mencerna sel dan melakukan sentrifugasi (ibid. di atas).

Suspensikan sel dengan larutan penyimpanan beku yang cocok, bagi menjadi tabung freezer yang disterilkan, istirahatkan selama beberapa menit, dan tentukan jenis sel dan tanggal penyimpanan beku.4℃ 30 menit, -20℃ 30 menit, -80℃ semalaman, dan kemudian disimpan dalam perfusi nitrogen cair.

Pembuatan larutan kriopreservasi: 70% medium 20% FBS 10% DMSO. DMSO harus ditambahkan perlahan dan dikocok terus.