Sebagai bahan pembantu dalam percobaan pendeteksian ELISA, Enzyme piring memainkan peran yang menentukan dan secara langsung mempengaruhi hasil eksperimen akhir. Kualitas dari Pelat enzim terutama tergantung pada kepekaannya terhadap adsorpsi protein, perbedaan kapasitas adsorpsi protein antara pelat dan lubang, dan perbedaan antara batch yang dibeli pelat enzim . Oleh karena itu, memilih sebuah pelat enzim produk dengan sensitivitas adsorpsi protein tinggi, perbedaan kecil antara lubang kapasitas adsorpsi protein, dan perbedaan kecil antara batch adalah jaminan bagi eksperimen untuk mendapatkan hasil eksperimen yang andal dan stabil.

Pelat enzim klasifikasi: menurut standar klasifikasi yang berbeda, piring memiliki klasifikasi yang berbeda.

1: Menurut jumlah lubangnya, dapat dibagi menjadi 96 lubang, 48 lubang, dll pelat enzim terutama digunakan dengan micropiring reader, the plate meter di pasaran paling banyak 96 lubang, jadi microplatenya 96 lubang.

2: Menurut dasar yang berbeda, itu dibagi menjadi dasar datar, dasar U, dasar V, dll.

Indeks bias alas datar rendah, yang cocok untuk deteksi di pelat mikro;

T Indeks bias pelat mikro U tinggi, nyaman untuk pengambilan sampel, pengambilan sampel, dan pencampuran, dan dapat langsung mengamati perubahan warna tanpa menempatkannya di pelat mikro, untuk menentukan apakah ada reaksi kekebalan yang sesuai.

Pelat mikro basis V dapat secara akurat menyerap sampel.

3: Menurut kemampuan pengikatan yang berbeda dari pelat mikro dan protein dan molekul lain, itu dibagi menjadi kekuatan pengikatan tinggi, kekuatan pengikatan sedang, dan aminasi.

(1) Daya ikat tinggi

Setelah permukaan pelat mikro ini, kemampuan pengikatan proteinnya sangat ditingkatkan, hingga 300~400ng IgG / cm2, dan berat molekul protein pengikat utama > 10 kD. Penggunaan microplate golongan ini dapat meningkatkan sensitivitas, dan dapat menurunkan konsentrasi dan jumlah protein yang terlapisi secara relatif, sehingga lebih mudah menghasilkan reaksi non spesifik. Setelah pelapisan dengan antigen atau antibodi, deterjen non-ionik tidak dapat secara efektif menutup tempat protein yang tidak terikat, dan protein tersebut harus digunakan sebagai agen sealant.

(2) Kekuatan pengikat sedang

Plat mikro tersebut secara pasif berikatan dengan protein melalui ikatan hidrofobik di permukaan, dan cocok sebagai pembawa fase padat untuk protein makromolekul dengan berat molekul > 20 kD, dengan kapasitas pengikatan protein 200 hingga 300 ng IgG/cm2. Karena karakteristiknya hanya mengikat makromolekul, sangat cocok untuk pembawa fase padat sebagai antibodi atau antigen yang tidak dimurnikan untuk mengurangi potensi reaktivitas silang nonspesifik. Pelat dapat berupa protein inert atau deterjen nonionik sebagai larutan penyegel.

(3) Aminasi

Pelat mikro ini setelah modifikasi permukaan memiliki gugus amino bermuatan positif, yang ikatan hidrofobiknya digantikan oleh ikatan hidrofilik. Kelas pelat mikro ini cocok sebagai pembawa fase padat untuk protein molekul kecil. Menggunakan buffer dan pH yang sesuai, permukaan berikatan dengan molekul kecil bermuatan negatif melalui ikatan ionik. Karena sifat hidrofilik permukaannya dan kemampuannya untuk terikat secara kovalen oleh pengikat silang lainnya, dapat digunakan untuk memperbaiki molekul protein yang larut dalam agen dekontaminasi seperti Triton-100, Tween 20, dll. Cacat pelat ini adalah karena berkurangnya hidrofobisitas; selain itu, permukaan harus ditutup secara efektif. Karena sifat permukaan hidrofilik dan kovalen, larutan sealing yang digunakan harus dapat berinteraksi dengan gugus fungsi apa pun dalam gugus amino nonreaktif dan pengikat silang yang dipilih.

4. Menurut warna dapat dibagi menjadi transparan, hitam, dan putih.

Transparan adalah yang paling umum digunakan untuk percobaan imunisasi terkait enzim yang paling umum. Dalam Relcontrast ke microplate transparan, ada juga microplate buram untuk deteksi bercahaya, umumnya hitam dan putih. Pelat hitam itu sendiri memiliki daya serap cahaya, sehingga sinyalnya jauh lebih rendah daripada pelat putih, sehingga umumnya digunakan untuk mendeteksi cahaya yang kuat, seperti deteksi fluoresensi. Pelat mikro putih digunakan untuk deteksi cahaya lemah, sering digunakan untuk chemiluminescence umum. Selain itu, black microplate juga dapat melemahkan masalah reaksi non spesifik. Pada saat yang sama, penting untuk dicatat bahwa dengan pelat mikro umum tidak dapat dideteksi bercahaya, karena cahaya yang dipancarkan dari reaksi chemiluminescence adalah isotropik, jika, dengan pelat mikro transparan, cahaya tidak hanya akan menyebar dari arah vertikal, tetapi juga dari arah horizontal, membuat cahaya dengan mudah melalui celah antara lubang dan dinding lubang, mengakibatkan cahaya dari nilai penyerapan cahaya lubang dipengaruhi oleh cahaya yang dipancarkan lubang yang berdekatan.

Pelat mikro yang baik harus memiliki kinerja adsorpsi yang baik, nilai blanko rendah, transparansi dasar lubang yang tinggi, dan kinerja serupa antara pelat dan di antara lubang pelat yang sama. Karena perbedaan bahan baku dan perbedaan proses produksi, kualitas berbagai produk sangat berbeda, oleh karena itu kinerja setiap batch microplate harus diperiksa terlebih dahulu sebelum digunakan. Metode inspeksi yang umum digunakan adalah konsentrasi IgG manusia tertentu (umumnya 10 ng/ml) yang dilapisi dengan sumur pelat ELISA, setelah dicuci, tambahkan pengenceran yang sesuai dari antibodi IgG anti-manusia berlabel enzim ke setiap sumur, cuci setelah pengawetan panas, penambahan warna substrat, hentikan reaksi enzim, dan ukur absorbansi larutan pada masing-masing sumur. Kondisi reaksi dikontrol sehingga pembacaan setiap sumur dijaga pada absorbansi sekitar 0,8. Rata-rata dari total pembacaan dihitung. Perbedaan antara rata-rata semua bacaan individu dan semua bacaan harus kurang dari 10%. Tiga lempeng mikro berikut adalah A, B, dan C sebagai contoh.

Metode langsung: untuk mendeteksi adsorpsi Human IgG pada permukaan pelat mikro

Metode sandwich antibodi ganda: antigen dalam serum positif untuk antibodi anti-manusia

Seperti dapat dilihat dari gambar di atas, pada ketiga jenis pelat bio enzim ini, pelat mikro kelas A memiliki efek adsorpsi protein yang lebih baik, tetapi juga meningkatkan sensitivitas adsorpsi protein, yang dapat memberikan data eksperimen yang lebih andal. Selain itu, Anda bisa bertanya tentang piring perbedaan bets. Berikut ini adalah perbedaan batch dari pelat tertentu. Seperti yang dapat dilihat dari bagan data perbedaan dalam-batch, pelat mikro memiliki stabilitas antar-batch yang baik, dan perbedaan koefisien variasi (CV) dalam-batch adalah sekitar 5,0%, yang secara signifikan lebih rendah daripada koefisien variasi dalam-batch di bawah 10,0% dalam standar kontrol kualitas untuk reaksi imun klinis. Oleh karena itu, cocok juga untuk percobaan ELISA.