Berita

Rumah / Berita / Langkah-langkah terperinci sentrifugasi untuk ekstraksi protein sitoplasma dan nuklir dengan sentrifugal pembekuan kecepatan rendah desktop

Langkah-langkah terperinci sentrifugasi untuk ekstraksi protein sitoplasma dan nuklir dengan sentrifugal pembekuan kecepatan rendah desktop

Diposting oleh Admin | 23 Mar
Centrifuge pembekuan kecepatan rendah desktop digunakan di laboratorium untuk pemisahan utama dan ekstraksi makromolekul biologis, sedimen, dll. Kepala putarnya terutama terbuat dari paduan aluminium, yang merupakan tipe datar dan tipe sudut. Tabung sentrifugal terbuat dari kaca keras, plastik keras polietilen dan tabung stainless steel. Centrifuge dilengkapi dengan motor penggerak, pengatur waktu, pengatur (indikator kecepatan) dan sistem pendingin (kisaran suhu yang dapat disesuaikan adalah - 20~ 40 ℃), yang dapat menggantikan kepala yang berputar dengan kapasitas yang berbeda dan jenis kecepatan rotasi yang berbeda sesuai dengan kebutuhan bahan sentrifugal.
Langkah-langkah terperinci sentrifugasi untuk ekstraksi protein sitoplasma dan nuklir dengan sentrifugal pembekuan kecepatan rendah desktop:
1. Tentukan keadaan pertumbuhan sel. Keadaan pertumbuhan sel harus 80% atau lebih baik:
2. Centrifuge pada 1500r/min selama 5 menit
3. Buang supernatan, cuci sel dengan PBS dingin dengan volume yang sama, dan ulangi 3 kali seperti pada langkah 2
4. Menurut perkiraan jumlah presipitasi, tambahkan 5 kali volume sisbuffer isotonik ke dalam partikel sel untuk membuat sel tersuspensi dengan lembut dan hindari busa sejauh mungkin
5. Tambahkan lysisbuffer ke dalam sel yang tersuspensi dan taruh di atas es selama 15 menit agar sel mengembang, yang dapat diperiksa dengan mikroskop
6. Untuk sel yang mengembang pada percobaan sel, tambahkan 10% IGEPALCA-630 agar konsentrasi akhir mencapai 0,3%, aduk rata, dan tambahkan perlahan
7. Centrifuge segera (gunakan tabung EP 1,5ml pada 5500r/min selama 30 detik untuk jumlah besar; gunakan tabung 50ml pada 5500r/min selama 2 menit untuk jumlah besar)
8. Pindahkan supernatan (protein sitoplasma) ke tabung pembekuan baru
9. Tangguhkan sel dengan 5 kali volume partikel tersuspensi dalam buffer isotonik dan aduk rata
10. Centrifuge suspensi sel pada 1500r/min selama 5 menit, dan buang supernatannya
11. Suspensikan partikel dengan 2/3 kali volume buffer ekstraksi
12. Tempatkan tabung pada mixer getar, kocok dan campur dengan kecepatan 700r/menit selama 15 menit, lalu dengan kecepatan 1400r/menit selama 15 menit. Seluruh proses harus hati-hati untuk menghindari busa
13. Centrifuge pada 9400r/min selama 15 menit, pindahkan supernatan ke tabung centrifuge beku baru setelah sentrifugasi suhu rendah
14.Bagi menjadi beberapa bagian dan bekukan dengan nitrogen cair dan simpan (penyimpanan jangka panjang harus pada -80 ℃, penyimpanan jangka pendek harus pada -20 ℃)
\

Contact Us

*We respect your confidentiality and all information are protected.