Sebelum percobaan, semua reagen dan sampel harus diseimbangkan dengan suhu kamar; setelah dilelehkan kembali, sampel harus disentrifugasi kembali dan diambil supernatannya untuk pengujian; untuk reagen atau persiapan sampel, campur dan hindari pembusaan; kalibrasi dan sampel direkomendasikan untuk pengujian rangkap.

1. Tambahkan ple: tambahkan larutan kerja standar ke dua sumur pertama secara bergantian, dan tambahkan dua lubang untuk setiap konsentrasi larutan kerja, 100 μ L dari masing-masing sumur. Sampel yang akan diuji ditambahkan ke sumur lain, 100 μ L per sumur (untuk konsentrasi sampel di atas rentang pengujian, sampel diencerkan dengan pengenceran standar & sampel). Pelat mikro dilapisi film dan diinkubasi pada suhu 37 ℃ selama 90 menit. Tip: Saat menambahkan sampel ke bagian bawah pelat mikro, cobalah untuk tidak menyentuh dinding lubang, kocok perlahan dan campur, untuk menghindari pembentukan gelembung. Waktu tambahan harus dikontrol dalam waktu 10 menit.

2. Antibodi/antigen terbiotinilasi: buang cairannya, dan kocok hingga kering, tanpa dicuci. 100 μL larutan kerja antibodi/antigen terbiotinilasi segera ditambahkan ke masing-masing sumur, dicampur, pelat mikro ditambah lapisan film, dan diinkubasi pada suhu 37℃ selama 1 jam.

3. Mencuci: kocok cairan di dalam lubang, tambahkan 350 μL cairan pencuci ke setiap sumur, rendam selama 1-2 menit, hisap atau kibaskan cairan di pelat mikro, dan keringkan di atas kertas penyerap yang tebal. Ulangi langkah piring cuci ini 3 kali. Tip: Mesin cuci dapat digunakan di sini dan di langkah pencucian lainnya. Setiap langkah pencucian sangat penting untuk percobaan.

4. konjugat enzim HRP: 100 μ L larutan kerja konjugat enzim per sumur, dicampur, dilapisi dengan film, dan diinkubasi pada suhu 37 ℃ selama 30 menit.

5. Mencuci: buang cairan di dalam sumur, dan cuci piring 5 kali dengan cara yang sama seperti langkah 3.

6. Substrat: tambahkan 90 μL larutan substrat (TMB) ke masing-masing sumur, aduk rata, tambahkan lapisan film, dan inkubasi pada suhu 37℃ selama sekitar 15 menit. Catatan: Waktu inkubasi harus dipersingkat atau diperpanjang sesuai dengan situasi perkembangan warna yang sebenarnya, tetapi tidak lebih dari 30 menit. Itu dapat dihentikan ketika gradien yang jelas muncul di lubang standar.

7. Penghentian: Tambahkan 50 μ L larutan terminasi ke masing-masing sumur untuk menghentikan reaksi. Catatan: urutan penambahan larutan terminasi harus sama dengan urutan penambahan larutan substrat.

8. Baca: Segera ukur kerapatan optik (OD) masing-masing sumur pada 450 nm dengan pembaca pelat mikro. Pembaca pelat mikro harus dibuka terlebih dahulu untuk menyiapkan prosedur pengujian.

9. Setelah percobaan, masukkan kembali reagen yang tidak terpakai ke dalam lemari es sesuai dengan suhu penyimpanan yang ditentukan hingga masa simpan.